猪细小病毒NS基因原核表达与多克隆抗体制备

• 作者: 张秀娟 熊颖黎 童德文 苗碧琛 邵婷 陈松彪 黄勇
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 多克隆抗体 NS基因 非结构蛋白 猪细小病毒
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1-8
• 页数: 8页
• 分类号: S852.659.2|Q789
• 字数: 5892字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2020.02.001

摘要

旨在制备抗猪细小病毒(PPV)非结构蛋白共有氨基酸的NS多肽多克隆抗体.根据GenBank(MK993540)公布的PPV基因组序列,克隆其非结构蛋白NS1、NS2共有基因序列(NS基因),并进行生物信息学分析.进而将NS基因克隆至原核表达载体pET-32a,构建重组质粒pET-32a-NS,转化至大肠埃希菌Rosetta(DE3)中进行诱导表达,利用镍柱亲和层析技术纯化表达的重组多肽,用重组多肽免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体.结果显示,PPV杨凌株NS基因长258 bp,编码86个氨基酸的多肽,是具有亲水性的非跨膜NS多肽,具有大量的B细胞线性表位.NS多肽在37℃、0.8 mol/L IPTG条件下,诱导6 h有大量的可溶性表达.免疫印迹试验结果显示,该多肽具有较好的抗原性.用纯化NS多肽免疫小鼠后获得鼠抗NS多肽的血清抗体效价为1:12800.用制备的NS多克隆抗体检测纯化的NS重组多肽及真核表达的NS1蛋白,均能检测出相应特异性条带,为进一步研究NS蛋白在PPV致病过程中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	童德文	西北农林科技大学动物医学院	91	938	15.0	27.0
2	黄勇	西北农林科技大学动物医学院	14	67	5.0	7.0
3	陈松彪	西北农林科技大学动物医学院	2	0	0.0	0.0
4	张秀娟	西北农林科技大学动物医学院	2	9	1.0	2.0
5	苗碧琛	西北农林科技大学动物医学院	1	0	0.0	0.0
6	熊颖黎	西北农林科技大学动物医学院	1	0	0.0	0.0
7	邵婷	西北农林科技大学动物医学院	1	0	0.0	0.0