Cpf1核酸酶的原核表达、纯化及多克隆抗体制备与鉴定

• 作者: 吴涛 孙春龙 孙静 王君 王报贵 董彬
• 来源期刊: 生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: CRISPR-Cpf1 大肠杆菌 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 23-27
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1736.2020.06.023

摘要

将Cpf1核酸酶N端166个氨基酸的DNA编码序列克隆至pET-28a(+)质粒中,在大肠杆菌BL21中进行重组表达,对诱导其表达的IPTG浓度和诱导时间开展条件优化.利用6×His纯化标签得到的重组蛋白作为抗原进行动物免疫,间接ELISA方法测定免疫后抗血清效价达到128000,并经Protein A纯化后得到抗体,Western Blot分析抗体的特异性,结果显示可以特异性识别大肠杆菌中表达的Cpf1(1-166)和Cpf1,为Cpf1在生物体中的检测提供工具,且将为推动CRISPR/Cpf1系统在生物体中的应用奠定良好的实验基础.