GLI1真核表达载体的构建、鉴定及其对肺癌PC9细胞增殖的影响

• 作者: 代娟娟 安佳佳 杜静 武艳 陈微微
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 肺肿瘤 GLI1 细胞增殖 PC9细胞 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1150-1154,后插3
• 页数: 6页
• 分类号: R734.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671⁃587x.20200607

摘要

目的:构建GLI1真核表达载体,探讨过表达GLI1对肺癌PC9细胞增殖的影响.方法:采用PCR法扩增GLI1基因的全长序列,克隆至pcDNA3.1真核表达载体,将重组质粒pcDNA3.1-GLI1(重组质粒组)和对照质粒pcDNA3.1(空载体组)转染肺癌PC9细胞.采用酶切鉴定法检测GLI1过表达载体的构建情况.通过G418筛选建立稳定过表达GLI1的PC9细胞和空载体对照细胞.RT-PCR法检测2组PC9细胞中GLI1 mRNA表达水平,Western blotting法检测2组PC9细胞中GLI1蛋白表达水平,CCK-8法检测2组PC9细胞增殖活性,细胞克隆形成实验检测2组PC9细胞中克隆形成数.结果:成功扩增获得GLI1的特异基因片段;构建的GLI1真核表达载体经双酶切鉴定后分别获得目的基因和载体片段.RT-PCR法检测,重组质粒组PC9细胞中GLI1 mRNA表达水平明显高于空载体组(P<0.01).Western blotting法检测,重组质粒组PC9细胞中GLI1蛋白表达水平明显高于空载体组(P<0.05).CCK-8法检测,培养72和96 h后,重组质粒组细胞增殖活性明显高于空载体组(P<0.01).细胞克隆形成实验,培养10 d时,重组质粒组细胞克隆形成数明显多于空载体组(P<0.01).结论:成功构建GLI1基因的真核过表达载体和过表达GLI1稳定转染的PC9细胞系,GLI1过表达能够促进肺癌PC9细胞的增殖能力.