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LMNA突变体HEK293、 C2C12模型的构建及其核纤层蛋白A/C亚细胞定位
LMNA突变体HEK293、 C2C12模型的构建及其核纤层蛋白A/C亚细胞定位
作者:
刘建云
吴向斌
柴竞艳
熊晖
聂红兵
谈丹丹
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
LMNA基因
核纤层蛋白A/C
慢病毒
基因突变
摘要:
目的 构建A型核纤层蛋白基因(LMNA)野生型、突变体的融合蛋白真核表达载体及LMNA突变体慢病毒载体,研究其在HEK293、C2C12中表达、核纤层蛋白A/C亚细胞定位及细胞核改变.方法 将野生型全长LMNA cDNA克隆入pEGFP-N1质粒,构建LMNA野生型质粒pEGFP-N1-LMNA,以野生型质粒为模板构建c.1117A>G定点突变质粒pEGFP-N1-LMNA-I373V.将构建的2种质粒分别转染HEK293、C2C12,用G418筛选转染的C2C12,荧光显微镜下观察细胞核形态及GFP标记的核纤层蛋白A/C亚细胞定位.以pEGFP-N1-LMNA-I373V为模板,构建pHBLV-h-LMNA-I373V-3?flag-GFP-PURO慢病毒,对慢病毒进行包装与滴度测定.pHBLV-GFP-PURO、pHBLV-LM-NA-C1117-3?flag-GFP-PURO分别转染C2C12,免疫荧光染色法观察转染后细胞核形态及核纤层蛋白A/C亚细胞定位的改变.结果 构建的pEGFP-N1-LMNA、pEGFP-N1-LMNA-I373V及pHBLV-h-LMNA-I373V-3?flag-GFP-PURO测序与目的基因序列完全一致.pEGFP-N1-LMNA转染的HEK293、C2C12核纤层蛋白A/C均匀表达于核膜下,pEGFP-N1-LMNA-I373V转染的HEK293、C2C12内核纤层蛋白A/C核内异常聚集,呈散点样分布;与HEK293相比,C2C12细胞转染效率明显降低.慢病毒转染C2C12的转染率高,突变体慢病毒转染的细胞核形态异常及核纤层蛋白A/C核内分布异常.结论 成功构建2种LMNA突变体真核表达载体及突变体转染的HEK293、C2C12模型,为LMNA突变体导致疾病的机制研究奠定科学基础.
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文献信息
篇名
LMNA突变体HEK293、 C2C12模型的构建及其核纤层蛋白A/C亚细胞定位
来源期刊
基础医学与临床
学科
医学
关键词
LMNA基因
核纤层蛋白A/C
慢病毒
基因突变
年,卷(期)
2020,(4)
所属期刊栏目
研究论文
研究方向
页码范围
483-489
页数
7页
分类号
R746.2
字数
3398字
语种
中文
DOI
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
熊晖
北京大学第一医院儿科
73
393
12.0
15.0
2
柴竞艳
九江学院附属医院神经内科
5
3
1.0
1.0
3
刘建云
九江学院基础医学院江西省系统生物医学重点实验室
11
47
4.0
6.0
4
聂红兵
九江学院附属医院神经内科
17
58
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5
吴向斌
九江学院附属医院神经内科
9
24
2.0
4.0
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谈丹丹
九江学院附属医院神经内科
4
9
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LMNA基因
核纤层蛋白A/C
慢病毒
基因突变
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
基础医学与临床
主办单位:
北京生理科学会
出版周期:
月刊
ISSN:
1001-6325
CN:
11-2652/R
开本:
大16开
出版地:
北京东单三条5号
邮发代号:
82-358
创刊时间:
1981
语种:
chi
出版文献量(篇)
7613
总下载数(次)
10
总被引数(次)
29500
相关基金
江西省自然科学基金
英文译名:
Natural Science Foundation of Jiangxi Province
官方网址:
http://www.jxstc.gov.cn/ReadNews.asp?NewsID=861
项目类型:
学科类型:
期刊文献
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