石斛属部分植物SRAP-PCR反应体系的建立与优化

• 作者: 张迎辉 杜溶讫 凡莉莉 杨旺利 荣俊冬 郑郁善 陈礼光
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 石斛属 SRAP 反应体系 优化
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 组学与生物技术
• 页码范围: 25-32
• 页数: 8页
• 分类号: Q75
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2021.01.004

摘要

建立石斛属(Dendrobium)植物SRAP-PCR反应体系,为石斛的品种鉴定与分类提供理论和技术基础.采用单因素及正交试验对反应体系中的各因子进行优化,确定最优退火温度,并筛选有效引物.结果表明:适用于石斛属植物SRAP 最佳的反应体系为:Mg2+2.5 mmol/L,dNTPs 0.25 mmol/L,Taq DNA 聚合酶1.25 U,引物0.4 μmol/L,模板DNA 30 ng,10×PCR buffer 2.5 μL,其余用灭菌后的ddH2O补足至25 μL.最优扩增程序为:94 ℃预变性5 min;94 ℃变性1 min,36 ℃复性1 min,72 ℃延伸1 min,5次循环;94 ℃变性1 min,根据不同引物的不同退火温度复性1 min,72℃延伸1min,30次循环;最终72 ℃延伸7 min,保存于4 ℃恒温箱中.应用所建立的优化反应体系成功地筛选出15条多态性较高的引物.