非洲猪瘟CD2v胞外区基因片段的真核表达及其多克隆抗体的制备

• 作者: 于浩洋 吴绍强 王彩霞 Grzegorz WOZNIAKOWSKI 刘晓飞 仇松寅 李新实 冯春燕 林祥梅
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 关键词: 非洲猪瘟病毒 CD2v 真核表达 多克隆抗体 竞争ELISA
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 45-52
• 页数: 8页
• 分类号: S852.659.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0012

摘要

本研究利用真核表达系统表达非洲猪瘟病毒的CD2v胞外区蛋白,研究其免疫特性,制备多克隆抗体并研究其性质,为研发特异性单抗奠定数据基础.以非洲猪瘟病毒Wuhan2019-1株(GenBank:MN393476.1)为模板,合成CD2v胞外区基因序列,并将其克隆至真核表达载体pCAGGS载体中,获得pC-AGGS-CD2v胞外区重组质粒.经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转染293F细胞,获得重组胞外CD2v蛋白(简称His-CD2v).用Ni-NTA柱纯化His-CD2v,并以此为抗原免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,利用ELISA和间接免疫荧光对多克隆抗体进行鉴定.结果显示,(1)His-CD2v融合蛋白在293F中以可溶形式表达,SDS结果显示,相对分子质量约为35?80 ku的弥散带;(2)融合表达的His-CD2v能与阳性血清反应,与对照不反应;(3)HisCD2v制备的多抗效价最高达1∶218 700,且能与阳性血清竞争性结合CD2v抗原.上述结果表明,His-CD2v融合蛋白的表达及其多抗的成功制备,为进一步筛选CD2v特异性单抗及研制竞争ELISA试剂盒,为非洲猪瘟感染与免疫鉴别方法的建立奠定了坚实的基础.