香蕉磷脂酶D的纯化与生化特性分析

• 作者: 何雪梅 唐雅园 孙健 李丽 向昱 杨兆杏 赵承刚 韦珍 唐杰
• 来源期刊: 西南农业学报
• 关键词: 香蕉 磷脂酶D 分离纯化 生化特性
• 年，卷（期）: 2021,（7）
• 所属期刊栏目: 生理生化·植物保护|PHYSIOLOGY & BIOCHEMISTRY ? PLANT PROTECTION
• 页码范围: 1413-1418
• 页数: 6页
• 分类号: S668.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16213/j.cnki.scjas.2021.7.007

摘要

[目的]分离纯化香蕉磷脂酶D(PLD)并分析其生化特性,为深入研究香蕉PLD打下基础.[方法]采用硫酸铵沉淀结合柱层析法对香蕉PLD粗酶液进行纯化,考察反应体系中香蕉PLD蛋白含量、Ca2浓度、pH和反应时间对PLD活性的影响,明确PLD的生化特性.[结果]80％硫酸铵沉淀结合DEAE-sepharose CL-6B阴离子交换柱、Hitrap SP HP阳离子交换柱和Sephadex G-200凝胶层析柱,可将香蕉PLD粗酶液纯化58.74倍,达到电泳纯,香蕉PLD的相对分子量约为43 kD;香蕉PLD活性最佳测定条件为:PLD蛋白含量30.00 μg、Ca2+浓度1.20 mmol/L、反应15.00 min、pH 6.5,确定香蕉PLD具有较强亲和力和较高催化活性.[结论]硫酸铵沉淀结合柱层析分离技术适用于香蕉PLD纯化,在PLD蛋白含量30.00 μg、Ca2+浓度1.20 mmol/L、反应15.00 min及pH 6.5条件下,香蕉PLD活性最高.