PelA-Expansin融合蛋白原核重组表达研究

• 作者: 魏玲玲 叶凯霞 李嘉欣 赵庆新
• 来源期刊: 生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 扩张蛋白基因 果胶酸裂解酶 融合表达 分离纯化 活性分析
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告|STUDY REPORTS
• 页码范围: 17-20,45
• 页数: 5页
• 分类号: Q786|Q816
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1736.2022.01.017

摘要

扩张蛋白(Expansin)具有削弱细胞壁多糖之间氢键,增强多糖降解酶降解多糖的效率.在食品领域、生物能源领域和生物制药领域,具有广泛的应用价值.自然状态下,Expansin蛋白在植物、真菌、细菌等生物中的表达量较少,目前,枯草芽孢杆菌Expansin重组表达研究受到广泛关注.以来源于构巢曲霉的果胶酸裂解酶(PelA)为融合标签,构建高效表达融合蛋白PelA-Expansin的工程菌newexpansin/pelA-pET-28a(+)/BL21(DE3),在OD600为0.4、0.01 mmol/L IPTG、15℃和150 r/min下,表达24 h,融合蛋白产量约为3.0 mg/mL.建立融合蛋白一次性His-tag亲和纯化工艺,工艺中上样、清洗和洗脱缓冲液中咪唑浓度分别为30、60和500 mmol/L,目标蛋白纯度约为95％,得率约为75％;融合蛋白协同纤维素酶、木聚糖酶和果胶酸水解酶酶降解多糖的效率分别为300％、150％和125％;为扩张蛋白Expansin在食品、能源、医药及农业等领域的应用奠定了基础.