pcDNA3.1(+)/ChM-Ⅰ表达质粒的构建及鉴定

• 作者: 周连仲 刘冲 苏玢 王明辉
• 来源期刊: 医学理论与实践
• 学科: 医学
• 关键词: 软骨调节素Ⅰ pcDNA3.1(+)质粒 肿瘤治疗
• 年，卷（期）: 2022,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 544-547
• 页数: 4页
• 分类号: R73-3
• 语种: 中文
• DOI: 10.19381/j.issn.1001-7585.2022.04.002

摘要

目的:为了研究软骨调节素Ⅰ的生物学作用,构建pcDNA3.1(+)/ChM-Ⅰ表达质粒.方法:用Trizol法提取大鼠软骨组织总RNA,根据ChM-Ⅰ基因序列(序列号:AF051425)设计特异引物,通过PCR获取ChM-Ⅰ目的基因,分别将ChM-Ⅰ目的基因的PCR产物和pcDNA3.1(+)质粒双酶切,并将两者定向连接,构建pcDNA3.1(+)/ChM-Ⅰ质粒,转化感受态细菌,挑取阳性单克隆并扩增,酶切鉴定阳性克隆,并对插入的ChM-Ⅰ片段进行测序.结果:结果显示与ChM-Ⅰ基因长度相符,序列无误,且读码框正确.结论:成功构建pcDNA3.1(+)/ChM-Ⅰ表达质粒,为进一步研究ChM-Ⅰ的生物学作用打下基础.