弓形虫主要表面抗原P30的克隆、表达与纯化

• 作者: 林建银 章涛 郑大利 黄清玲
• 来源期刊: 中国寄生虫学与寄生虫病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫 表面抗原P30 克隆 纯化
• 年，卷（期）: 2003,（4）
• 所属期刊栏目: 实验报道
• 页码范围: 230-233
• 页数: 4页
• 分类号: R382.5|R392.11
• 字数: 4457字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-7423.2003.04.011

摘要

目的通过分子克隆技术获取弓形虫主要表面抗原P30蛋白.方法自行设计引物,通过PCR扩增获得P30基因片段,采用EcoR Ⅰ、Xho Ⅰ双酶切,定向克隆到载体pThioHis中,转化大肠杆菌Top10,利用酶切、DNA序列分析鉴定阳性克隆,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,融合蛋白通过镍结合树脂(ProBondTM Resin)进行纯化,并用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)鉴定.结果PCR、酶切、连接的产物经电泳鉴定,均与预期设计相符合.DNA序列分析结果表明,除一个同义突变,其余均与文献报道相符.IPTG诱导表达后经层析纯化获得46 kDa含P30的融合蛋白.结论通过定向克隆、表达与纯化,获得含P30的融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林建银	福建医科大学生物化学与分子生物学系	125	908	16.0	23.0
2	章涛	福建医科大学生物化学与分子生物学系	37	107	5.0	9.0
3	黄清玲	福建医科大学生物化学与分子生物学系	28	99	6.0	8.0
4	郑大利	福建医科大学生物化学与分子生物学系	25	115	6.0	9.0