细菌体内同源重组构建pAdEasy-1-hNGFβ重组体

• 作者: 余开峰 周青山 姚尚龙 王家宁 王清秀 钟和英 马大青 黄永章
• 来源期刊: 华中科技大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 同源重组 腺病毒 人β神经生长因子
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 287-290
• 页数: 4页
• 分类号: Q784
• 字数: 2842字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-0741.2005.03.009

摘要

目的采用细菌内同源重组法高效制备含神经生长因子β基因(hNGFβ)的重组腺病毒质粒.方法 hNGFβ自载体pBLAST44-hNGFβv02中切出,亚克隆至质粒pBluescriptⅡsk(+)中,形成pBluescriptⅡsk(+)-hNGFβ,自pBluescriptⅡsk(+)-hNGFβ中酶切出hNGFβ DNA,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV中,形成转移质粒pShuttle-CMV-hNGFβ,在感受态大肠杆菌BJ5183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组,得到重组腺病毒载体pAdEasy-1-hNGFβ.结果线性化的pShuttle-CMV-hNGFβ转化含pAdEasy-1的高效感受态大肠杆菌BJ5183,24 h后获得了30%阳性重组质粒克隆,经酶切获得大于20 kb的大片段和4.5 kb的特征性条带,PCR反应扩增出731 bp片段.结论应用细菌内同源重组能快速构建含hNGFβ基因的重组腺病毒载体pAdEasy-1-hNGFβ,为hNGFβ基因的研究及应用奠定了基础.