亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒VP1基因真核表达载体的构建及其免疫活性的初步分析

• 作者: 伏小平 张永光 方玉珍 潘丽 王宝琴 王文秀 王永录 董金杰 蒋守田
• 来源期刊: 中国兽医科技
• 学科: 农学
• 关键词: 口蹄疫病毒 亚洲Ⅰ型 VP1基因 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 微生物学
• 页码范围: 461-464
• 页数: 4页
• 分类号: S852.659.6|Q786
• 字数: 2875字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2005.06.011

摘要

提取亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒总RNA,用特异性引物通过RT-PCR反应获得了约750 bp的核酸片段,将其与pGEM-T Easy载体连接,并转化大肠埃希氏菌JM109.重组质粒经PCR、酶切鉴定及测序,证明所克隆的片段含有完整的VP1基因;将重组质粒与表达载体pcDNA3.1(+)分别用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后连接,构建成重组表达质粒,转化宿主菌DH5α,筛选阳性克隆.测序结果证明,目的基因正确插入到表达载体中,命名为pcDNAV;用同样方法将IL-18基因插入pcDNAV中,命名为pcDNAVI.用pcDNAVI免疫豚鼠,2周后加强免疫1次,每周用ELISA检测豚鼠血清中的抗体水平.结果表明,pcDNAVI可引发机体产生体液免疫.