小反刍兽疫病毒H糖蛋白基因原核表达载体的构建及表达

• 作者: 刘玉洪 周晓黎 尹尚莲 徐自忠 杨云庆 花群义 董俊 许靖逸 高洪
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 小反刍兽疫病毒 H糖蛋白基因 表达
• 年，卷（期）: 2006,（9）
• 所属期刊栏目: 微生物学
• 页码范围: 692-695
• 页数: 4页
• 分类号: S852.659.5|Q786
• 字数: 3305字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2006.09.002

摘要

参照GenBank中小反刍兽疫病毒(PPRV)H抗原基因序列,人工合成了PPRV H基因,将其克隆至pUC18-T质粒中,转化E.coli JM109感受态细胞,构建并选择PPRV H基因克隆重组质粒,经核苷酸序列分析正确,将其克隆至pBAD/Thio-TOPO载体中,转化E.coli TOP10感受态细胞,核苷酸序列分析证实,成功构建了PPRV H基因重组表达载体.经不同浓度L-阿拉伯糖诱导,可稳定、高效地表达PPRV H抗原.SDS-PAGE分析结果表明,用终浓度为0.2 g/L的L-阿拉伯糖诱导5 h的表达量最高,表达蛋白为分子质量约83 ku的融合蛋白;经薄层扫描分析,其表达产量约占茵体总蛋白的10%.Western-blotting检测表明,诱导的蛋白能与PPRV H蛋白单抗发生特异性反应,说明表达的融合蛋白中含有PPRV H糖蛋白抗原.