重组人IL-4大肠杆菌表达与纯化

• 作者: 刘勇 孙九如 林跃鑫 邱燕 陈霖杰 黄智华 黄阳滨
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: rhIL-4 大肠杆菌 发酵 纯化
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 基因工程
• 页码范围: 962-967
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 5058字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2006.06.016

摘要

根据大肠杆菌密码子偏爱性优化并合成人白细胞介素4基因,以pET30a(+)为载体构建了重组表达质粒pET30a(+)/rhIL-4,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达并超声破菌检测重组蛋白的表达形式.采用5L发酵罐培养工程菌,发酵液OD600为0.6时诱导3.5 h收集菌体,检测目的蛋白的表达量.收集的菌体经压榨破菌获得包涵体,通过包涵体变性、层析、透析复性等方法对rhIL-4进行纯化.采用人红细胞白血病细胞(TF-1)测定纯化的rhIL-4的生物活性.测序表明目的基因已插入载体pET30a(+)中,重组蛋白以包涵体形式表达,单位体积重组蛋白的表达量达200mg/L发酵液,建立了对包涵体形式表达的rhIL-4纯化方法,最终得率为40mg/L发酵液,纯度大于98%,回收率为20%以上.免疫印迹法检测诱导表达的重组蛋白和纯化的蛋白为IL-4,N端氨基酸序列测定结果与理论相符,生物活性检测纯化的蛋白比活性达2.5×106 AU/mg.这为rhIL-4进一步产业化研究建立了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林跃鑫	福建师范大学生命科学学院	44	1098	19.0	32.0
2	邱燕	福建师范大学生命科学学院	3	94	3.0	3.0
3	孙九如		1	7	1.0	1.0
4	黄阳滨		3	14	2.0	3.0
5	黄智华		1	7	1.0	1.0
6	陈霖杰		1	7	1.0	1.0
7	刘勇		1	7	1.0	1.0