应用GFP质粒构建及转染技术探讨Syk(L)核移位机制

• 作者: 宋新明 汪建平 王磊 胡英
• 来源期刊: 中山大学学报（医学科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 长脾脏酪氨酸激酶 绿色荧光蛋白 核移位 乳腺癌
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 614-618,639
• 页数: 6页
• 分类号: R730.2
• 字数: 4494字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-3554.2006.06.004

摘要

[目的] 通过研究Syk(L)在乳腺癌细胞亚细胞器中的分布和移位机制,探讨Syk(L)抑制乳腺癌的可能性机制.[方法] 采用细胞胞核、胞浆分离技术和Western blot的方法,检测乳腺癌细胞系BT474中两种Syk蛋白异构体在细胞内的分布.构建绿色荧光蛋白(GFP)和Syk(L)核移位相关功能域融合蛋白质粒,转染入Cos 7细胞内,荧光显微镜下观察融合蛋白在细胞内的分布.[结果] BT474细胞的细胞浆中可检测到Syk(S)和Syk(L)的表达,细胞核中只检测到Syk(L)的表达.在Cos 7细胞中,GFP与Syk(L)的缺失域(deletion domain,DEL域)融合蛋白均匀分布于细胞内,GFP与Syk(L)的IDB域融合蛋白聚集于细胞核中;将DEL域上的294K、300K、及305K突变域非碱性氨基酸后构建成GFP-IDB(L)-M,突变的融合蛋白则失去核聚集现象.[结论] 在乳腺癌细胞中,Syk(L)可从细胞胞浆移位到细胞核内.Syk(L)的IDB域具有完整的核移位功能,能将融合的胞浆蛋白GFP转移到细胞核内;DEL域的碱性氨基酸具有核定位信号功能.Syk(L)在乳腺癌细胞中的抑癌功能与其核移位有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王磊	中山大学附属第一医院结直肠肛门外科	89	527	11.0	19.0
2	胡英	中山大学附属第一医院结直肠肛门外科	20	151	7.0	12.0
3	汪建平	中山大学附属第一医院结直肠肛门外科	141	1371	20.0	31.0
4	宋新明	中山大学附属第一医院结直肠肛门外科	39	201	8.0	13.0