颗粒溶素的表达纯化及生物学活性分析

• 作者: 仲人前 周晔 王燕 谷明莉 邓安梅 钱琤 陈孙孝 陈波 陈燕
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 颗粒溶素 基因表达 生物学活性
• 年，卷（期）: 2006,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 829-833
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 4773字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0258-879X.2006.08.006

摘要

目的:采用原核表达系统对颗粒溶素(granulysin,GNLY)进行体外表达,纯化及活性鉴定.方法:以体外培养的人外周血单个核细胞(PBMC)为模板,RT-PCR扩增编码GNLY的cDNA片段,插入pMD-18-T 载体,测序正确后再亚克隆到质粒pET28a(+) 中,构建重组表达质粒pET28a(+)-GNLY,转化大肠杆菌BL21(DE3) plysS,IPTG诱导表达融合蛋白,包涵体经变复性后用Ni亲和层析纯化,CFU法测定蛋白活性.结果:成功地将GNLY cDNA片段插入载体pET28a(+)中,构建了表达质粒pET28a(+)-GNLY.经诱导在原核表达系统中以包涵体形式高效表达了相对分子质量为9 000的融合蛋白,变复性纯化后的GNLY蛋白经CFU法检测,发现其具有细胞毒活性且细胞毒作用具有剂量依赖性.结论:本实验利用原核表达系统成功地表达了具有生物学活性的GNLY,为研究其功能、作用机制及临床应用奠定了基础.