球形幽门螺杆菌vacA基因表达质粒构建及表达

• 作者: 唐小龙 汪雪峰 王克霞 陈琳
• 来源期刊: 中国公共卫生
• 学科: 医学
• 关键词: 球形幽门螺杆菌 vacA基因 基因重组 原核表达
• 年，卷（期）: 2007,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 834-836
• 页数: 3页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3745字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1001-0580.2007.07.028

摘要

目的 构建球形幽门螺杆菌vacA基因的重组表达质粒,初步观察其在E.coli中的表达.方法 采用亚克隆技术,用BamH Ⅰ和Sac Ⅰ从重组质粒pMD-18T-vacA上切下vacA基因,插入表达载体pET32a(+)质粒,转化大肠埃希菌BL21,在氨苄青霉素阳性的LB平板上筛选阳性重组子,并经双酶切及PCR扩增鉴定.重组质粒pET32a(+)-vacA转化大肠埃希菌,(IPTG)诱导表达后进行(SDS-PAGE)电泳和凝胶扫描定量分析.结果 重组质粒酶切和PCR鉴定与预期结果相符,成功构建携带vacA基因的重组原核表达质粒pET32a(+)-vacA.核酸序列测定及同源性分析证实,表达质粒pET32a(+)-cagA中所含vacA基因与GenBank中的vacA序列同源性达到99.2%.vacA基因在大肠埃希菌中诱导表达后获得约156 kD蛋白,蛋白含量占全菌体蛋白含量15.5%.结论 成功构建球形H.pylori vacA基因重组表达质粒,并获得高效表达,为研究该基因蛋白的生物学特性及DNA疫苗研制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈琳	安徽理工大学医学院病原生物学教研室	14	29	3.0	4.0
2	王克霞	安徽理工大学医学院病原生物学教研室	99	774	13.0	24.0
3	唐小龙	安徽理工大学医学院病原生物学教研室	37	158	8.0	10.0
4	汪雪峰	安徽理工大学医学院病原生物学教研室	30	65	4.0	5.0