重组hKGF2原核表达载体的构建及其蛋白质的纯化

• 作者: 余德荣 游力 王郡甫 许晓群 赵跃然 高春义
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组hKGF2 克隆 原核表达 镍亲和层析
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 9-13
• 页数: 5页
• 分类号: Q5
• 字数: 3694字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8135.2007.02.002

摘要

角质细胞生长因子2(keratinocyte growth factor 2,KGF2)是新近发现的成纤维细胞生长因子家族中的一员,又称FGF10,是上皮细胞特异性的促有丝分裂剂,具有广泛的应用前景.为构建其高效原核表达体系,用RT-PCR法从培养的人胚胎肺成纤维细胞中提取成熟hKGF2 cDNA,进行T-A克隆;经测序后,构建pET-30a(+)-hKGF2重组表达载体,将其转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株.IPTG诱导表达后,重组蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定为高效可溶性表达.镍亲和层析(Ni+-NTA)一步法纯化后获得纯度达95%以上的目的蛋白,生物活性研究表明,重组hKGF2能有效促进人胚胎肾上皮细胞的增殖.