小鼠CSRP2基因的克隆、融合表达及蛋白的分离纯化

• 作者: 孙景豫 薛赢 邱建华 高雪
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: cysteine rich protein 2 RT-PCR 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 918-920
• 页数: 3页
• 分类号: Q78
• 字数: 2486字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2007.06.009

摘要

目的:获得小鼠CSRP2(cysteine rich protein 2)基因片段,高效表达、纯化CSRP2.方法:用RT-PCR技术从小鼠心脏组织中提取总DNA并扩增出相应大小的CSRP2 DNA片段,将其与pGEM-T-easy载体连接后测序,将测序正确的CSRP2从BamH Ⅰ和HindⅢ酶切位点克隆入原核表达载体pRSET-A,将连接产物转化大肠杆菌BL21,挑出阳性克隆,IPTG诱导表达重组的6×His融合蛋白,对重组融合蛋白通过镍柱进行纯化.结果与结论:PCR获得的CSRP2序列与GenBank报道的一致(为675 bp);重组载体在大肠杆菌BL21中以包涵体形式高效表达;融合蛋白经SDS-PAGE和Western blot分析,在相对分子质量约24×103处有特异的蛋白条带,目的蛋白表达量占菌体总蛋白量的25%;重组蛋白经镍柱纯化后,得到了高纯度的CSRP2融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	薛赢	第四军医大学西京医院放疗科	1	1	1.0	1.0