人肌红蛋白原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化

• 作者: 候巍 刘力华 刘晓林 史宏博 方艳秋 段秀梅 许淑芬 谭岩 车媛媛
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 肌红蛋白 基因表达 大肠杆菌
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 技术交流
• 页码范围: 369-372
• 页数: 4页
• 分类号: R78
• 字数: 2575字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-587X.2007.02.049

摘要

目的:构建人肌红蛋白(Mb)原核表达载体并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白.pQE方法:根据已报道的人Mb基因序列,采用RT-PCR技术从人骨骼肌组织中获得肌红蛋白cDNA序列.将所得的PCR产物插入克隆载体pGEM-Teasy中,得重组质粒,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,将酶切目的片段插入原核表达载体pQpQEE30中并转化大肠杆菌(E coli)M15,通过IPTG诱导表达出带有6个组氨酸的融合蛋白.经镍固定金属亲和层析纯化.结果:序列分析表明,人Mb基因成熟肽编码区含有465 bp,编码153个氨基酸;与GenBank(NM203378)中已报道的Mb核苷酸序列有98.50%同源性.经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和免疫印迹分析显示,表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的31%,相对分子质量约为16 700,并与商品化的人Mb单抗呈特异性反应.经Ni2+-NTA agarose纯化获得SDS-PAGE电泳下单一条带.结论:在大肠杆菌中获得了人Mb的高效表达.