真核表达载体pEGFP-claudin-1的构建及其在293T细胞中的表达

• 作者: 张野 李军 潘蕾 王平忠 白雪帆 贾战生 马力 魏欣
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: claudin-1 绿色荧光蛋白 真核表达载体 293T细胞
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 444-446
• 页数: 3页
• 分类号: R392.11
• 字数: 2454字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2008.05.005

摘要

目的:构建真核表达载体pEGFP-claudin-1,并在293T细胞中进行表达.方法:用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增claudin-1开放读码框(ORF)基因,将其插入到pEGFP-C3载体的Xho Ⅰ和BamH Ⅰ酶切位点,构建真核表达载体pEGFP-claudin-1,酶切鉴定并测序.通过脂质体法转染293T细胞,进行荧光检测和Western blot分析.结果:构建了含有claudin-1 ORF的真核表达质粒pEGFP-claudin-1,转染293T细胞后,经荧光可见细胞膜有EGFP-claudin-1 融合蛋白的表达,Western blot检测发现有相对分子质量(Mr)49 000的蛋白条带.结论:成功地构建真核表达载体pEGFP-claudin-1,并在293T细胞中表达,为研究claudin-1的功能奠定了基础.