应用H1-U6双启动子RNAi载体筛选人泛素结合酶hUBE2W的RNAi有效靶点

• 作者: 周晓巍 张莹莹 朱恒奇 李朝 杨志新 许龙 黄培堂
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 泛素结合酶 hUBE2W RNA干涉
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 1975-1980
• 页数: 6页
• 分类号: Q5
• 字数: 3498字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2008.11.020

摘要

hUBE2W是新近鉴定出的一种Ⅰ型泛素结合酶,可能在肿瘤发生和DNA损伤修复过程中起重要作用.RNA干涉是指通过形成局部双链RNA进而特异性地降解细胞内同源基因mRNA的机制,目前已成为基因功能研究的有力工具.通过构建H1-U6双启动子RNAi载体,可以在体内直接转录出针对hUbe2w基因的两段互补小RNA,更接近于生理状态下小干涉RNA的作用.利用RT-PCR方法从293FT细胞总RNA中扩增出hUbe2w基因,分别将其连接至质粒pGL3-Control,pCMV-myc和pDsRed-express-C1中,以便在mRNA水平和蛋白水平检测RNA干涉效果.RNA干涉载体分别与上述报告载体共转染293FT细胞,测定萤光素酶活性和hUBE2W蛋白表达水平,结果显示靶点125和259能够在mRNA水平和蛋白质水平显著降低hUbe2w的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄培堂	军事医学科学院生物工程研究所	190	1493	20.0	30.0
2	周晓巍	军事医学科学院生物工程研究所	43	220	8.0	13.0
3	许龙	军事医学科学院生物工程研究所	10	32	3.0	5.0
4	朱恒奇	军事医学科学院生物工程研究所	16	50	5.0	6.0
5	杨志新	军事医学科学院生物工程研究所	8	33	3.0	5.0
6	张莹莹	军事医学科学院生物工程研究所	8	38	4.0	6.0
7	李朝	军事医学科学院生物工程研究所	9	58	4.0	7.0