人FcγRⅡ真核表达质粒的构建及稳定转染细胞系的建立

• 作者: 乔松林 何礼洋 席俊 张乃生 张利娜 张改平 张红 苗现伟
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: huFcγRⅡ受体 COS7细胞 免疫荧光检测 玫瑰花环试验
• 年，卷（期）: 2008,（9）
• 所属期刊栏目: 短篇论著
• 页码范围: 1110-1113
• 页数: 4页
• 分类号: Q785
• 字数: 3494字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0258-879X.2008.09.023

摘要

目的:建立稳定表达人FcγRⅡ(human Fc gamma receptor Ⅱ ,huFcγRⅡ)的真核细胞系,为后续研究奠定基础.方法:采用RT-PCR方法从人外周血白细胞合成FcγRⅡcDNA,构建huFcγRⅡ表达质粒pcDNA3-huFcγRⅡ,经酶切和PCR鉴定后,将pcDNA3-huFcγRⅡ质粒通过脂质体转染法转染COS7细胞,并经G418筛选获得稳定表达huFcγRⅡ的细胞克隆.采用免疫荧光法和玫瑰花环试验检测huFcγRⅡ的表达.结果:构建的pcDNA3-huFcγRⅡ真核表达质粒经酶切鉴定与预期一致,稳定转入COS7细胞后,经免疫荧光染色,约90%的转染细胞可见荧光,而未转染的COS7对照细胞未见荧光.结论:成功构建pcDNA3-huFcγRⅡ真核表达质粒,建立了稳定表达huFcγRⅡ的细胞系,为进一步研究奠定了基础.