NYD-SP15基因的原核表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 刘庆淮 李建民 王云 王珍 陈洁
• 来源期刊: 国际眼科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 原核表达 NYD-SP15 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 实验论著
• 页码范围: 483-486
• 页数: 4页
• 分类号: R77
• 字数: 4004字
• 语种: 中文

摘要

目的:克隆NYD-SP15基因,构建融合表达载体,在大肠杆菌中表达,并制备抗体.方法:PCR技术扩增NYD-SP15全长开放阅读框,克隆入原核表达载体PET28a,转化大肠杆菌感受态细胞,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后收集菌体蛋白,行SDS-PAGE电泳.将此融合蛋白Ni柱纯化后免疫BALB/C小鼠,Western blotting鉴定.结果:成功地构建了PET28a-NYD-SP15原核表达质粒,并获得了高效表达NYD-SP15的BL21菌株,表达的His标签融合蛋白,分子量为58kDa左右,经免疫小鼠获得了抗NYD-SP15抗体.经Western blotting法分析,抗体为NYD-SP15特异性抗体.结论:构建的NYD-SP15基因的原核表达载体,体外高效表达蛋白,免疫小鼠获得抗NYD-SP15抗体,将为眼部增殖性视网膜病变(PVR)的研究及治疗奠定坚实的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈洁	南京医科大学细胞生物学与生物遗传系	74	394	12.0	15.0
2	李建民	南京医科大学细胞生物学与生物遗传系	30	187	4.0	13.0
3	王云	南京医科大学细胞生物学与生物遗传系	25	65	4.0	6.0
4	刘庆淮	江苏省人民医院眼科	29	29	3.0	5.0