幽门螺杆菌hp1188基因的原核表达及免疫学鉴定

• 作者: 杨致邦 范贵荣 郭丽媛 韩飞
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 幽门螺杆菌 hp1188基因 表达 免疫原性 体内试验
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 340-345
• 页数: 6页
• 分类号: R392.11
• 字数: 5630字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建高效表达Hp1188重组蛋白的基因工程菌pQE30-hp1188-DH5α,提纯重组蛋白,鉴定其抗原性和免疫原性.通过小鼠灌胃试验,验证Hp1188蛋白阻止幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)在胃内定植的作用.方法:构建重组质粒pQE30-hp1188,DNA测序分析正确后,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达.表达蛋白用Ni2+-NTA树脂纯化,SDS-PAGE分析纯度,Bradford法测定浓度,Western blot鉴定对相应抗原的特异性,双向琼脂扩散实验检测效价.纯化重组蛋白和粘膜佐剂霍乱毒素B亚单位(Cholera toxin subunit B,CTB)的混合液灌胃免疫接种预防组BALB/c小鼠,同时设阴性对照组和阳性对照组,免疫4周后用H.pylori NCTC 11637攻击3次,末次攻击4周后处死小鼠,进行胃组织H.pylori 培养;H.pylori 定植半定量、炎症程度及其炎症活动度的评分,以评价重组蛋白对胃组织H.pylori 感染的免疫保护作用.结果:构建的重组表达质粒pQE30-hp1188经DNA测序证实序列完整,插入的基因片段全长810 bp,与基因文库中的hp1188基因同源性达98%,并在大肠杆菌DH5α中表达出分子量约为30 kD大小的可溶性目的蛋白,表达量占全菌总量的47%,表达蛋白纯化后纯度达90%,浓度为1.0 mg/ml.Western blot证实有良好抗原结合特异性,双向琼脂扩散效价为1∶16.预防组H.pylori 感染率、定植及炎症程度评分均明显低于阳性对照组(P＜0.05).预防组不仅可以降低H.pylori 的定植,而且能减轻H.pylori造成的小鼠胃组织的局部慢性炎症反应.结论:成功构建了基因工程菌pQE30-hp1188-DH5α,并高效表达了Hp1188重组蛋白,表达蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,在小鼠体内能阻止H.pylori 的定植.