手掌参γ-硫素的原核表达及纯化

• 作者: 任正隆 冯娟 刘艳 周建平 李雪峰 袁剑波 郝军莉
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 手掌参 γ-硫素 原核表达
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 187-190
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 4404字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2009.02.011

摘要

目的:在原核系统中高效表达手掌参γ-硫素,并对其进行纯化.方法:通过筛选手掌参cDNA文库获得γ-硫素基因(gcthionin),分别对其全长及信号肽编码序列缺失的cDNA片段进行PCR扩增,克隆入原核表达载体pET-32(a),构建重组质粒pET-32(a)/gcthionin和pET-32(a)/△gcthionin;测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白;SDS-PAGE分析后,采用Ni-NTA亲和层析柱及凝胶柱对可溶性蛋白进行纯化,Western blotting鉴定.结果:gcthionin基因开放式阅读框全长225 nt,编码一个由74个氨基酸残基组成的蛋白;带有信号肽的重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达;信号肽缺失可以极大地提高外源蛋白的可溶性,该可溶性产物经Ni-NTA柱及凝胶过滤后可获得纯度较高的蛋白,经Western blotting分析,相对分子质量约21.9×103处有明显的蛋白条带,与预期蛋白分子大小一致.结论:信号肽编码序列缺失的△gcthionin可在大肠杆菌中可溶、高效表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘艳	电子科技大学生命科学与技术学院	23	60	5.0	6.0
2	冯娟	电子科技大学生命科学与技术学院	30	339	12.0	17.0
3	周建平	电子科技大学生命科学与技术学院	27	319	12.0	17.0
4	任正隆	电子科技大学生命科学与技术学院	61	742	15.0	23.0
5	李雪峰	电子科技大学生命科学与技术学院	4	11	2.0	3.0
6	袁剑波	电子科技大学生命科学与技术学院	1	2	1.0	1.0
7	郝军莉	电子科技大学生命科学与技术学院	1	2	1.0	1.0