绿色荧光蛋白标记的TGF-β1shRNA真核表达载体的构建及鉴定

• 作者: 康建 李娜 郭亮 闫承慧 韩雅玲 齐岩梅
• 来源期刊: 中国应用生理学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: LR重组 TGF-β1shRNA 载体构建 沉默效率鉴定
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 244-249
• 页数: 6页
• 分类号: Q593.2
• 语种: 中文

摘要

目的:构建小鼠转化生长因子β1(TGF-β1)短发夹RNA(shRNA)真核表达载体,探讨TGF-β1在血管发育中的调控作用.方法:根据GenBank小鼠TGF-β1mRNA序列,设计合成三对短链寡核苷酸,退火后形成双链DNA并克隆至入门载体pEN_mH1c.将插入目的基因片段的入门载体与带有绿色荧光蛋白(GFP)标签的shRNA真核表达载体pDS_hpEy进行LR重组反应,完成三个TGF-β1shRNA表达载体的构建,分别命名为pDS_Ta,pDS_Tb和pDS_Tc.经测序确认后,转染小鼠成纤维细胞(NIH/3T3),筛选稳定表达的细胞克隆,以RT-PCR及Western blot方法检测转染后TGF-β1 mRNA和蛋白表达.结果:RT-PCR和Western blot显示pDS_Tc可明显下调NIH/3T3细胞TGF-β1的mRNA和蛋白表达,mRNA下调约为70%,蛋白表达减少约65%.结论:GFP标签TGF-β1shRNA表达载体能够阻断TGF-β1基因表达,可作为研究TGF-β1调控血管发育机制的一个工具,为阐明TGF-β1信号传导通路奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩雅玲		746	3758	26.0	37.0
2	闫承慧		84	276	9.0	14.0
3	康建		54	326	11.0	16.0
4	齐岩梅		5	13	2.0	3.0
5	李娜		11	51	3.0	7.0
6	郭亮		3	23	2.0	3.0