APE1基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 刘景丰 李艳菊 郑智华 高美钦 黄爱民
• 来源期刊: 福建医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 癌,肝细胞 内切核酸酶类 嘌呤类 嘧啶类 肝肿瘤 RNA干扰,慢病毒属,遗传载体
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 86-90
• 分类号: R735.7|R394.3|R345.7
• 字数: 3080字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-4194.2010.02.002

摘要

目的 构建APE1基因慢病毒载体,为其后续的体内外实验研究提供基础. 方法 应用基因工程技术,筛选出两条针对APE1基因的RNAi靶序列KD1、KD2,分别与pGCIL-GFP载体连接,经转化筛选鉴定后,包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度,分别命名为LV-APE1-shRNA1、LV-APE1-shRNA2,两种病毒颗粒分别感染MHCC97-H细胞,设为感染LV-APE1-shRNA1、LV-APE1-shRNA2细胞组,同时设未感染病毒组和感染空载体细胞组.Real-time PCR和Western blot检测MHCC97-H细胞中APE1基因的mRNA和蛋白的表达. 结果 PCR及测序结果与预期结果一致,LV-APE1-shRNA1、LV-APE1-shRNA2的病毒滴度为4×108 TU/mL和7×108 TU/mL.与未感染病毒组和感染空载体细胞组相比,2组慢病毒组APE1基因mRNA和蛋白的表达均明显下降,LV-APE1-shRNA1、LV-APE1-shRNA2对APE1基因的mRNA表达的抑制率分别为75%,90%,对APE1蛋白表达的抑制率达90%,95%. 结论 成功构建高效阻断APE1基因表达的RNAi慢病毒表达载体,为应用RNAi进一步研究APE1基因在肝癌中的作用机制和基因治疗奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘景丰	附属第一医院肝病中心	1	2	1.0	1.0