人Snapin基因片段的原核表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 孙晓莉 张朝 张沙沙 袁秀杰 赵钟钟 陈中
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Snapin 多克隆抗体 心脏
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 710-713
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 语种: 中文

摘要

目的 制备兔抗人Snapin的多克隆抗体,检测其特异性以及Snapin蛋白在心脏组织中的分布.方法 构建pGEX-4T-1-Snapin N/C质粒,通过原核表达和纯化分别获得带有snapin基因N端(1-54Aa)和C端(60-136Aa)表达产物(融合蛋白GST-Snapin N/C),通过多点皮下注射免疫新西兰家兔,多次免疫后获得血清,用Protein G Agrose亲和纯化血清,获得IgG型高效价抗Snapin多克隆抗体.结果 经过ELISA检测发现二种抗体效价高,滴度在1:256 000时仍有较强信号.用Western blotting以及免疫组织化学检测发现二种抗体的特异性良好,能特异性识别小鼠心脏组织Snapin蛋白,其中尤以抗Snapin C抗体为佳.结论 成功制备出高效价、强特异性的抗Snapin N/C抗体,为进一步研究Snapin蛋白在心脏中的作用提供了条件.