重组结核杆菌Ag85a-ESAT6融合蛋白的原核表达、纯化及其生物活性

• 作者: 张群 朱琳 楼觉人
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 分枝杆菌,结核 Ag85a ESAT6 原核细胞 基因表达 生物活性
• 年，卷（期）: 2010,（11）
• 页码范围: 1153-1157
• 分类号: R378.91+1|Q78
• 语种: 中文

摘要

目的 原核表达、纯化重组结核杆菌Ag85a-ESAT6融合蛋白.并检测其生物活性.方法 将Ag85a-ESAT6融合基因片段插入pET-28a(+)载体中,构建重组质粒pET-28a.Ag85a.ESAT6.转化大肠杆菌B127I(DE3),IPTG诱导表达.表达产物在变性条件下经Ni.琼脂糖凝胶层析柱纯化复性后,在体外对经5种不同类型的表达结核杆菌Ag85a和ESAT6的重组痘苗病毒免疫的小鼠脾淋巴细胞进行刺激,以MTT法检测脾淋巴细胞的增殖反应.结果 重组质粒pET.28a-Ag85a-ESAT6经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的重组融合蛋白相对分子质量约41 000,主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的55.65%;纯化复性的重组融合蛋白纯度达95%以上.表达量约为1.2 g/L发酵液,且具有良好的反应原性;与空痘苗病毒或生理盐水免疫的小鼠相比,5种重组痘苗病毒免疫的小鼠脾淋巴细胞与Ag85a-ESAT6融合蛋白共培养后,增殖活性明显升高(P<0.01).结论 成功利用原核系统表达了结核杆菌Ag85a.ESAT6融合蛋白,纯化复性的Ag85a.ESAT6融合蛋白具有生物学活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	楼觉人	上海生物制品研究所第二研究室	27	67	5.0	6.0
2	张群	上海生物制品研究所第二研究室	7	20	3.0	4.0
3	朱琳	上海生物制品研究所第二研究室	6	16	2.0	3.0