人髓样细胞触发受体-1原核表达载体的构建和表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 刘伟 卢燕 张良清 徐军发 李明意 郑淑华
• 来源期刊: 中华实验外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人髓样细胞触发受体-1 原核表达载体 脓毒症 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1438-1440
• 分类号: R394
• 字数: 2944字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2011.09.013

摘要

目的 构建人髓样细胞触发受体-1(TREM-1)原核表达载体使其表达并制备多克隆抗体。方法 采用特异性引物扩增人TREM-1胞外段cDNA,经酶切、连接、构建到原核表达载体pET28a(+),将构建的重组表达质粒转化入E.coli BL21( DE3)菌株,采用IPTG诱导表达、Ni-NTA 柱亲和层析纯化目的蛋白、SDS-PAGE分析蛋白纯度,将纯化的目的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并对其进行纯化及鉴定。结果 序列测定证实构建的重组表达载体pET28a(+)-TREM-1含有人TREM-1编码序列,其序列分析与Genbank中公布序列对比一致,质粒在E.coli中诱导表达相对分子质量(Mr)为21.80 kDa的目的蛋白,SDS-PAGE分析表明纯化后的目的蛋白达到电泳纯,双向琼脂扩散法检测抗体效价为1:16,ELISA法检测抗体效价为1:25 600,Western blot分析显示抗体能特性结合人TREM-1重组蛋白。结论 成功构建高表达重组人TREM-1蛋白的原核表达载体及制备高效价兔抗人TREM-1多克隆抗体。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐军发	广东医学院临床免疫学教研室	114	719	13.0	20.0
2	张良清	广东医学院附属医院麻醉科	70	620	13.0	23.0
3	李明意	广东医学院附属医院肝胆外科	42	140	6.0	8.0
4	卢燕	广东医学院附属医院麻醉科	13	88	6.0	9.0
5	郑淑华	广东医学院临床免疫学教研室	18	129	6.0	11.0
6	刘伟	广东医学院临床免疫学教研室	19	144	7.0	11.0