小鼠Lin28基因的克隆及原核表达

• 作者: 宁方勇 安星兰 安铁洙 张秋婷 朴善花 王春生
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: ICR小鼠 Lin28 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 456-460
• 分类号: Q95-33
• 字数: 3256字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2011.06.002

摘要

目的 探讨获取小鼠Lin28蛋白的方法.方法 提取8.5 d ICR小鼠胚胎mRNA后反转录为cDNA序列,用一对两端引入特定酶切位点(Nco Ⅰ及Xho Ⅰ)引物,从该cDNA中扩增出Lin28基因编码区序列；将获得的Lin28基因编码区序列克隆到pMD18-T载体上.对质粒双酶切回收其中Lin28基因片段,与pET-30a(+)载体相连接并转化Rosetta( DE3)型大肠杆菌,用IPTG诱导表达,最后采用SDS-PAGE对表达结果进行分析.结果 对所克隆的Lin28蛋白编码区的DNA序列分析表明,Lin28 CDS区包括终止密码子在内为630 bp,与参照DNA( NM_145833)相比同源性为99.37％,与参照氨基酸序列相比同源性为100％；在IPTG诱导下pET-30a(+)-Lin28重组质粒可表达与预期相符的约为27.5×103的蛋白质.结论 利用克隆的小鼠Lin28基因,采用原核表达方法,成功获得小鼠Lin28蛋白,为进一步开展以重组蛋白诱导体细胞重编程研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宁方勇	东北林业大学生命科学学院	40	122	5.0	9.0
3	安铁洙	东北林业大学生命科学学院	75	199	8.0	10.0
4	王春生	东北林业大学生命科学学院	61	134	7.0	9.0
5	朴善花	东北林业大学生命科学学院	53	94	5.0	7.0
6	张秋婷	东北林业大学生命科学学院	13	37	3.0	5.0
9	安星兰	东北林业大学生命科学学院	4	5	1.0	2.0