胞苷磷酸激酶基因的克隆与原核表达

• 作者: 吴娟娟 殷冬梅 沈勤 翟旭光
• 来源期刊: 现代医药卫生
• 学科: 医学
• 关键词: 克隆胞苷磷酸激酶(CMPK) 克隆 大肠杆菌 转基因工程菌
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 47-49
• 分类号: R34
• 字数: 2695字
• 语种: 中文

摘要

目的:克隆胞苷磷酸激酶(CMPK)基因,构建携带CMPK基因的原核表达载体,诱导表达具有活性的重组CMPK融合蛋白,获得转基因工程菌.方法:利用PCR法扩增大肠杆菌基因组DNA,纯化的PCR产物链接至pMD18-T载体上,得到重组质粒pMD18-T-CMPK,转化E-coli BL21(DE3)感受态细胞,酶切鉴定;分别用BamH I和XhoI限制性内切酶双酶切重组质粒pMD18-TCMPK和pET28a(+)表达载体.连接后,转入E.coli BL21(DE3)感受态细胞,酶切鉴定.用终浓度1 mmol/L的IPTG诱导一定时间(3、6h)后,取E.coli上清液做电泳分析.结果:所获CMPK基因全长为786 bp,编码含有262个氨基酸的蛋白,当A值为0.6～0.8时重组质粒经IPTG诱导3h后,相对分子质量约30000处出现目的蛋白条带,随着时间的延长,蛋白表达量增加不明显.结论:成功地克隆CMPK基因,表达了大肠杆菌BL21(DE3)重组CMPK融合蛋白,为胞苷磷酸激酶进一步开发和应用奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈勤	南通大学医学院生化教研室	31	160	7.0	11.0
2	殷冬梅	南通大学医学院生化教研室	24	122	6.0	10.0
3	翟旭光	南通大学医学院生化教研室	16	51	4.0	5.0
4	吴娟娟	南通大学医学院生化教研室	22	70	5.0	7.0