谷胱甘肽-S转移酶-中期因子融合蛋白原核表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 郭翔
• 来源期刊: 中国基层医药
• 学科: 医学
• 关键词: 中期因子 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 841-843
• 分类号: R9
• 字数: 2796字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1008-6706.2012.06.021

摘要

目的 构建谷胱甘肽-S-转移酶(GST)和中期因子(MK)融合蛋白的原核表达质粒,并表达和纯化蛋白,制备多克隆抗体.方法 通过RT-PCR技术从人胃癌组织中扩增入MK编码序列,克隆入表达载体pGEX-1λT中,获得表达质粒pGEX-MK,并在大肠杆菌BL21 (DE3)中经IPTG诱导表达,通过亲和层析纯化表达的GST-MK融合蛋白,并以重组蛋白免疫兔子.结果 成功构建了GST-MK融合蛋白的原核表达载体,经诱导表达纯化得到GST-MK融合蛋白.免疫兔子后取多抗血清以间接ELISA检测效价达1∶64 000,Western blotting分析显示多克隆抗血清对MK蛋白特异结合.结论 MK在大肠杆菌中成功表达及其多克隆抗体的获得,为研究MK生物功能奠定了基础.