MIR-122慢病毒表达载体构建及稳定转染HepG2细胞系

• 作者: 于芳 唐红卫 张旭 梁琳琳 聂勇战 陈蕊蕊
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: microRNA mir-122 慢病毒表达载体 稳定转染 HepG2细胞
• 年，卷（期）: 2012,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1849-1852
• 分类号: Q75|Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:构建人mir-122慢病毒表达载体,感染肝癌细胞HepG2,建立稳定表达mir-122的HepG2细胞系.方法:以人has-mir-122成熟序列,设计并合成引物,采用PCR的方法扩增目的基因,并连接到慢病毒表达质粒pGCSIL-GFP(含绿色荧光蛋白GFP基因)中.对重组质粒进行双酶切鉴定后,进行mir-122基因慢病毒(pGCSIL-GFP-miR- 122)的包装及病毒滴度测定,用构建好的慢病毒表达载体感染HepG2细胞,qPCR检测感染后细胞中MIR-122的变化.通过流式细胞仪检测荧光蛋白GFP,western blot检测mir- 122靶分子CAT-1,验证pGCSIL-GFP-miR- 122在HepG2细胞中的表达效果.结果:pGCSIL-GFP-miR- 122经双酶切分析及测序,插入序列正确.qPCR检测显示转入病毒后mir-122在细胞中的表达显著提高.表明mir- 122慢病毒表达载体构建成功.流式细胞仪根据GFP荧光筛选纯化感染后细胞,感染率达90％以上.Western blot显示mir-122明显抑制其靶分子表达.进一步验证pGCSIL-GFP-miR- 122在细胞中的稳定表达.结论:成功构建mir-122慢病毒表达载体,并建立稳定表达的细胞系,为研究mir- 122在人体所起的作用及功能机制打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张旭	第四军医大学西京消化病医院肿瘤生物学国家重点实验室	42	141	7.0	9.0
2	于芳	第四军医大学西京消化病医院肿瘤生物学国家重点实验室	17	72	6.0	7.0
3	聂勇战	第四军医大学西京消化病医院肿瘤生物学国家重点实验室	35	194	8.0	12.0
4	唐红卫	第四军医大学西京消化病医院肿瘤生物学国家重点实验室	7	70	4.0	7.0
5	梁琳琳	第四军医大学西京消化病医院肿瘤生物学国家重点实验室	2	0	0.0	0.0
6	陈蕊蕊	第四军医大学西京消化病医院肿瘤生物学国家重点实验室	3	3	1.0	1.0