刚地弓形虫活化蛋白激酶C受体1基因的克隆和原核表达及纯化和抗原性分析

• 作者: 关丽 刘红丽 孟晓丽 张铁娥 殷丽天 殷国荣 王海龙
• 来源期刊: 环境与健康杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 刚地弓形虫 活化蛋白激酶C受体1 原核表达 亲和纯化 抗原性
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 基础与应用
• 页码范围: 593-597
• 分类号: R994.6
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆刚地弓形虫活化蛋白激酶C受体1(TgRACK1)基因,原核表达、纯化TgRACK1,并分析其抗原性.方法 制备弓形虫RH株速殖子总RNA,根据TgRACK1基因全长编码序列(GenBank登录号:AY547291)的开放阅读框设计引物并进行逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增,扩增产物经双酶切后连接入pGEX-6p-1载体,重组质粒转化大肠埃希菌DH5α,阳性菌落经菌液PCR、双酶切及DNA测序进行鉴定.将重组质粒pGEX-6p-1-TgRACK1转化至大肠埃希菌BL21(DE3)并加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物；分别以抗GST标签抗体和兔抗弓形虫血清为一抗,免疫印迹(Western blotting)分析鉴定重组蛋白及其抗原性.重组融合蛋白经GST琼脂糖凝胶亲和纯化,纯化蛋白经SDS-PAGE分离,考马斯亮蓝染色结合凝胶成像系统分析其纯度.结果 RT-PCR扩增产物约为970 bp,重组质粒pGEX-6p-1-TgRACK1构建成功.经IPTG诱导获得相对分子质量约63 kDa的可溶性重组蛋白.诱导表达的蛋白质为带GST标签的重组融合蛋白,且能被兔抗弓形虫血清识别.亲和纯化后获得纯度大于95％的重组TgRACK1蛋白质.结论 克隆得到弓形虫活化蛋白激酶C受体1基因,原核表达并纯化出该基因编码的蛋白质,且该重组蛋白具有抗原性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王海龙	山西医科大学寄生虫学教研室	60	295	9.0	14.0
2	殷国荣	山西医科大学寄生虫学教研室	125	764	13.0	20.0
3	刘红丽	山西医科大学寄生虫学教研室	63	337	10.0	15.0
4	孟晓丽	山西医科大学寄生虫学教研室	65	406	10.0	17.0
5	殷丽天	山西医科大学生理学系	20	62	4.0	7.0
6	张铁娥	山西医科大学寄生虫学教研室	5	5	1.0	2.0
7	关丽	山西医科大学寄生虫学教研室	5	8	2.0	2.0