猪博卡病毒VP2基因的克隆与原核表达

• 作者: 何孔旺 倪艳秀 张雪寒 李彬 杜露平 温立斌 王小敏 茅爱华 郭容利
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 猪博卡病毒 VP2基因 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 796-799
• 页数: 4页
• 分类号: Q785
• 字数: 3152字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2013.04.018

摘要

为研究猪博卡病毒VP2蛋白的功能及其在疫病诊断中的作用,对其基因进行了克隆和原核表达.根据猪博卡病毒基因组序列(GenBank登录号GU902967-GU902971)设计了1对引物,采用PCR方法扩增猪博卡病毒的VP2基因,并将其克隆到表达载体pET32a(+)中,构建重组质粒pET32a-VP2,经测序鉴定正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3),并进行IPTG诱导表达.结果表明,重组菌可表达分子量为49 000的融合蛋白,蛋白质表达量较高,且以可溶性形式存在于菌体中.表达产物经纯化后,目的蛋白纯度较好.Westem blot结果显示,表达的VP2蛋白能与His抗体发生特异性免疫反应.说明该试验成功克隆了猪博卡病毒的VP2基因并进行了原核表达,为研究该蛋白的功能及建立血清学诊断方法奠定了基础.