A组链球菌M蛋白重组多肽原核表达载体构建及融合蛋白的表达

• 作者: 丁月霞 倪琼琼 刘金来
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: A组β溶血性链球菌 emm基因 M蛋白 GST融合蛋白
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 29-34
• 页数: 6页
• 分类号: R541.2
• 字数: 4950字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2013.01.005

摘要

目的:设计针对A组β溶血性链球菌M1和M12蛋白的复合多肽；构建含M蛋白基因(emm基因)1型和12型特异性抗原决定簇基因及其保守区J14肽基因的GST标签的重组表达载体;并诱导和优化GST融合蛋白的表达.方法:在NCBI Genebank和Olig0 6引物设计软件中选择分别编码M蛋白emm基因1型和12型信号肽后35个氨基酸及其相同的保守区14肽基因序列(全长270 bp),通过重叠PCR(Overlap PCR)合成所需的核苷酸序列,经测序确定序列完全和设计的相匹配后,将该重组片段克隆到pGEX-4T-1表达载体中,阳性克隆经双酶切和测序鉴定正确后建立稳定表达该重组质粒的大肠杆菌BL21株系(pE/B)；通过聚丙烯酰胺凝胶的考马斯亮蓝染色和Western blot来检测在不同时间(O、2、6、8、18和24小时)和温度(25℃、30℃和37℃)以及不同浓度(0.01、0.1、1 mmol/L)异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导GST融合蛋白(GST/emm)表达情况,并对诱导表达的GST/emm切胶进行质谱分析鉴定.结果:成功构建含有emml和emm12抗原决定簇及M蛋白保守区J14肽基因的原核表达载体；并诱导其稳定表达,在1 mol/L IPTG诱导6～8小时达高峰,不同温度下均有过量表达；质谱检测诱导蛋白GST/emm条带结果正确.结论:成功构建A组p溶血性链球菌的emm1型和emm12型原核表达载体,并稳定诱导GST/emm表达,为下一步研究GST/emm的纯化、酶切以及免疫原性的鉴定和疫苗研制打下夯实的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘金来	中山大学第三附属医院心血管内科	90	396	10.0	13.0
2	倪琼琼	中山大学第三附属医院心血管内科	3	14	3.0	3.0
3	丁月霞	广州医学院第五附属医院心血管内科	7	18	3.0	4.0