含B7-H1 shRNA基因的慢病毒表达载体的制备及其抑制效果鉴定

• 作者: 史圣甲 席文锦 张剑宁 杨安钢 杨帆 温伟红 王曦 皇甫罗锴 郭张燕 陈晓燕
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: B7-H1 shRNA 慢病毒载体 U251MG细胞
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 242-245
• 分类号: R392.12
• 语种: 中文

摘要

目的 设计针对B7-H1的shRNA序列,构建慢病毒表达载体,包装成病毒颗粒后检测其对U251细胞中B7-H1基因的沉默效果.方法 设计3对针对B7-H1 mRNA的shRNA,化学合成正义链和反义链,退火后与酶切后的pLKO.1载体进行连接.测序正确后包装成病毒并感染U251细胞,分别用qRT-PCR及Western blot法检测干扰效果.结果 qRT-PCR及Western blot结果证实设计的3条RNA干扰序列中有2条可有效沉默U251细胞中B7-H1的表达.结论 所制备的针对B7-H1的shRNA慢病毒能特异性沉默B7-H1.