胱抑素C原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化

• 作者: 刘一凡 唐红卫 孙禅 李绵洋 李迪 王成彬 端永艳
• 来源期刊: 解放军医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 胱抑素C 基因表达 大肠埃希菌 镍柱亲和层析
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1055-1058
• 页数: 4页
• 分类号: R562.25
• 字数: 3864字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-5227.2013.10.018

摘要

目的：构建胱抑素C(cystatin C，Cys-C)原核表达载体并表达、纯化、鉴定目的蛋白。方法根据GeneBank报道的Cys-C基因序列，采用RT-PCR技术从人胚肾细胞系HEK293中获得Cys-C的cDNA序列，经PCR、酶切及测序确认最终获得重组载体pET-30a(+)-CysC，转化大肠埃希菌Rosetta，通过异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalac-topyranoside，IPTG)诱导表达、经镍柱亲和层析法纯化获得Cys-C融合蛋白。结果序列分析表明，人Cys-C基因成熟肽编码区编码122个氨基酸；与GeneBank(NM-000099.2)中已报道的序列有100%的同源性。经IPTG诱导表达， SDS-PAGE电泳和ELISA分析显示，表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的20%，重组蛋白相对分子质量约为20000，经Ni2+-NTA agarose纯化获得SDS-PAGE电泳下单一条带并与商品化的人Cys-C单抗呈特异性反应。结论在大肠埃希菌中获得了Cys-C的表达，并经镍柱亲和层析得到较纯的胱抑素。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王成彬	解放军总医院临检科	123	761	12.0	22.0
2	李绵洋	解放军总医院临检科	21	106	6.0	9.0
3	刘一凡	中南大学湘雅医学院医学检验系	3	10	2.0	3.0
4	唐红卫	解放军总医院临检科	4	27	3.0	4.0
5	孙禅		1	3	1.0	1.0
6	端永艳		1	3	1.0	1.0
7	李迪		1	3	1.0	1.0