近平滑假丝酵母(R)-羰基还原酶在大肠杆菌中的外泌表达及高效转化(R)-苯基乙二醇

• 作者: 张荣珍 徐岩 李尧慧 梁宏博 王磊 范文来
• 来源期刊: 工业微生物
• 关键词: (R)-羰基还原酶 分泌表达 甘氨酸 大肠杆菌 近平滑假丝酵母
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 研究与应用
• 页码范围: 13-18
• 页数: 6页
• 字数: 4517字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6678.2014.03.003

摘要

克隆了近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)(R)-羰基还原酶基因rcr,构建胞外表达工程菌Escherichia coli BL21(DE3)/pET20b-rcr,实现了(R)-羰基还原酶在大肠杆菌中高效外泌表达,周质空间和发酵液酶的比活力分别达0.68 U/mg和0.26 U/mg,与大肠杆菌的胞内体系重组酶相比,酶的比活力提高了近两倍.为了更好地促进该重组酶的外分泌于大肠杆菌细胞外,通过添加温和型化学渗透剂甘氨酸,改善细胞壁的透性,(R)-羰基还原酶的活力提高至1.99 U,与添加甘氨酸前相比,酶活力提高了12.4倍,比活提高了4.3倍.浓缩后的发酵液催化2-羟基苯乙酮,产生(R)-苯基乙二醇,产率为88.1％,e.e.值为93.9％.与胞内重组酶相比,产率和光学纯度分别提高了44.4％和15.9％.本研究通过构建(R)-羰基还原酶的大肠杆菌分泌表达体系,大幅度提高了(R)-羰基还原酶的比活和生物转化手性醇的效率.