结核分枝杆菌rv1738基因的原核表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 孙林 李求春 潘志明 焦新安 王均华 霍如松
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 结核分枝杆菌 Rv1738蛋白 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 页码范围: 492-496
• 页数: 5页
• 分类号: S855.2|S852.618
• 语种: 中文

摘要

为了在大肠杆菌中克隆表达结核分枝杆菌rv1738基因,并制备针对Rv1738蛋白的小鼠多克隆抗体,以结核分枝杆菌H37Rv的基因组DNA为模板,PCR扩增rv1738基因,构建重组表达质粒pET-30a(+)-rv1738.重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白表达,通过镍柱亲和纯化重组蛋白,用SDS-PAGE鉴定目的蛋白的表达情况,并用Western-bolt分析表达蛋白的反应原性.最后,以纯化的Rv1738蛋白免疫C57BL/6小鼠制备多克隆抗体.结果显示,成功构建了原核表达载体pET-30a(+)-rv1738,经IPTG诱导在重组大肠杆菌中表达出分子质量为20 ku的目的蛋白,并且以可溶的形式表达;对表达产物进行镍柱亲和纯化,获得了纯度较高的融合蛋白.重组蛋白Rv1738能与家兔抗H37Rv多抗血清发生特异反应,具有良好的反应原性.纯化的Rv1738蛋白免疫小鼠后,能有效地刺激特异性抗体的产生,血清ELISA效价达到1∶8 800,且具有良好的特异性.以上结果表明,成功克隆表达了结核分枝杆菌rv1738基因,并制备了针对Rv1738蛋白的小鼠多克隆抗体,这一结果为探索Rv1738蛋白在结核病疫苗开发和新型诊断试剂研制方面的潜能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	焦新安		249	2602	25.0	38.0
2	潘志明		163	1328	20.0	28.0
3	李求春		24	97	6.0	9.0
4	孙林		21	110	5.0	9.0
5	霍如松		3	4	1.0	2.0
6	王均华		1	0	0.0	0.0