原核表达载体pGEX-4T-1/Snapin的构建和表达鉴定

• 作者: 刘奇 汤俊明
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Snapin基因 基因克隆 原核表达 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 临床检验技术研究
• 页码范围: 733-735
• 页数: 3页
• 分类号: R329.2
• 字数: 3072字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13602/j.cnki.jcls.2014.10.04

摘要

目的 构建pGEX-4T-1/Snapin原核表达载体并在大肠埃希菌中高效表达,以纯化得到Snapin/GST融合蛋白.方法 用RT-PCR从小鼠血小板RNA中扩增Snapin基因.将目的片段装入原核表达载体pGEX-4T-1并转化至大肠埃希菌E.coliDH5α中,经过IPTG诱导,SDS-PAGE及凝胶扫描分析目的蛋白的表达水平.结果 成功获得小鼠Snapin基因并构建得到重组表达质粒pGEX-4T-1/Snapin.筛选获得pGEX-4T-1/Snapin/E.coli DH5α重组转化菌株,诱导表达得到融合蛋白Snapin/GST.结论 成功构建小鼠Snapin原核表达载体,并在E.coli DH5α中高效表达融合蛋白Snapin/GST,为深入研究Snapin蛋白的生物学结构和功能奠定基础.