低温β-半乳糖苷酶分离纯化及酶学性质研究

• 作者: 华霄 张雪 杨瑞金 范宇婷 许琪
• 来源期刊: 食品与机械
• 关键词: 低温β-半乳糖苷酶 拉恩氏菌 酶纯化 酶学性质
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 提取与活性
• 页码范围: 174-178
• 页数: 5页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-5788.2014.03.043

摘要

对来自新疆天山冻土的Rahnella sp.R3所产的胞内低温β-半乳糖苷酶进行纯化,并对其酶学性质进行研究.采用硫酸铵分级沉淀、Phenyl Sepharose CL-4B疏水层析、Q Sepharose High Performance阴离子交换层析、Sephacryl S-200 High Resolution凝胶过滤层析,得到电泳纯酶.酶的活性回收率为21.3％,纯化倍数为35.6,比酶活由1.28 U/mg提高到45.54 U/mg.SDS-PAGE电泳显示其表观分子量为57.3 kDa.酶学性质研究表明,该酶最适反应温度为45℃,在15℃时的酶活为最高酶活的40％,4℃时的酶活为最高酶活的23％.该酶对热敏感,45℃保温45 min酶活全部丧失.纯酶的最适pH为7.0,在pH 6.5～7.5时保持稳定.5 mmol/L Na+、Ca2、Cu2+、Al3+、Zn2+对酶活力有不同程度的抑制作用,其中Al3+抑制作用最强,Na+、Ca2+抑制作用不明显.5 mmol/L Mg2+、K+对酶活力具有促进作用,其中Mg2+促进作用较强,使酶活提高到1.19倍.25℃以ONPG为底物的Vmax,Km值分别为7.19 mol/(min· mL)、4.64 mmol/L.