玉米 APX 基因的克隆及其原核表达研究

• 作者: 任瑛 宋希云 裴玉贺 赵美爱 郭新梅
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 生物学
• 关键词: APX 原核表达 pET28a(+) IPTG BL21(DE3)
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 页码范围: 49-55
• 页数: 7页
• 分类号: Q78
• 字数: 4379字
• 语种: 中文

摘要

为了研究冷胁迫处理下的玉米抗坏血酸过氧化物酶的作用，根据GenBank发表的APX基因的ORF序列设计引物，利用RT-PCR从冷胁迫后的玉米自交系（ E28）叶片总RNA中经cDNA转化， pMD19-T载体的亚克隆，获得APX基因开放阅读框，长度为753 bp，编码250个氨基酸残基。生物信息学分析显示，APX 相对分子质量和理论等电点依次为27．3 kDa和5．56。将携带完整的ORF序列连入表达载体pET-28a（＋）中，APX基因经IPTG诱导后高效表达，SDS-PAGE电泳检测到目标蛋白的大小约为27．3 kDa，与预测结果一致。抗盐分析显示，重组大肠杆菌BL21（pET28-APX）的抗盐性明显高于对照菌株BL21（pET28）且其抗NaCl的临界浓度为0．6 mol/L，这为后期对作物的抗逆研究提供了科学依据。