H-Ras结构域的原核表达及纯化

• 作者: 冯滢滢 叶棋浓 张云静 张蓉 徐小洁 李玲 洪甜 赵克 郭靖
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 人H-Ras 片段 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 648-651
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2991字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2015.05.013

摘要

目的:克隆人H-Ras部分片段基因,获得其原核表达产物,并对融合蛋白进行纯化.方法:采用PCR技术从质粒Myc-H-Ras中扩增H-Ras(1-165)和H-Ras(165-189)结构域片段,将其克隆到pGEX-KG载体中,在大肠杆菌Rossate中表达后,利用GST-Sepharose 4B亲和珠对原核表达产物进行纯化,以SDS-PAGE和Western印迹鉴定表达与纯化产物.结果:从Myc-H-Ras质粒中分别扩增获得约500和100 bp的DNA片段,并克隆至pGEX-KG载体,经测序与目的序列完全一致;在大肠杆菌Rossate中诱导表达出相对分子质量分别为46×103和29×103的目的蛋白,经纯化后获得了纯度较高的重组蛋白GST-H-Ras(1-165)和GST-H-Ras(165-189).结论:获得了重组蛋白GST-H-Ras(1-165)、GST-H-Ras(165-189),为后续深入研究H-Ras影响肿瘤细胞生长的机制奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	叶棋浓		138	519	11.0	17.0
2	徐小洁	军事医学科学院生物工程研究所	51	112	6.0	7.0
3	张蓉	第二炮兵总医院肛肠科	33	468	11.0	21.0
4	赵克	第二炮兵总医院肛肠科	31	277	11.0	15.0
5	洪甜	军事医学科学院生物工程研究所	5	1	1.0	1.0
6	冯滢滢	第二炮兵总医院肛肠科	11	23	3.0	4.0
7	李玲	军事医学科学院生物工程研究所	11	10	2.0	2.0
8	郭靖	军事医学科学院生物工程研究所	4	4	1.0	1.0
9	张云静	第二炮兵总医院肛肠科	4	1	1.0	1.0