短发夹RNA慢病毒载体稳定抑制NLRP3表达的HepG2细胞的构建

• 作者: 何文俊 孙晓雅 宋晓艳 母义明 郝好杰 韩为东 韩庆旺
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: NLRP3 短发卡RNA 慢病毒载体 HepG2细胞
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 174-177,277
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3933字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2015.02.004

摘要

目的：构建针对NLRP3基因的短发夹RNA（shRNA）慢病毒表达载体，在HepG2细胞中鉴定该载体对NLRP3的抑制效果。方法：设计针对NLRP3基因的shRNA序列，将其插入慢病毒表达载体pWPT-U6-shRNA-CMV-GFP中，将载体与包装质粒psPAX2、pMD2.G共转染293T细胞，进行病毒包装；得到的病毒原液浓缩后系列稀释为9个浓度递减的病毒液，分别转染293T细胞后进行滴度测定；用获得的慢病毒液感染人肝癌细胞系HepG2，获得稳定沉默NLRP3的细胞株；利用实时定量PCR和Western印迹检测稳定细胞株中NLRP3的沉默效应。结果：构建了具有沉默效应的慢病毒干扰载体；稀释法测定干扰病毒滴度为2×108 TU/mL；实时定量PCR和Western印迹实验均证实慢病毒转染后，细胞株中NLRP3表达水平明显降低。结论：构建了人NLRP3基因特异性慢病毒干扰载体,获得NLRP3基因稳定干扰的HepG2细胞株。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郝好杰	解放军总医院基础医学所分子生物室	45	183	7.0	10.0
2	母义明	解放军总医院内分泌科	329	2074	22.0	31.0
3	韩为东	解放军总医院基础医学所分子生物室	113	744	13.0	23.0
4	宋晓艳	解放军总医院基础医学所分子生物室	4	15	2.0	3.0
5	何文俊	解放军总医院基础医学所分子生物室	7	19	2.0	4.0
6	韩庆旺	解放军总医院内分泌科	4	6	1.0	2.0
7	孙晓雅	解放军总医院内分泌科	3	12	2.0	3.0