产顺式-4-L-羟脯氨酸工程菌的构建及转化条件的优化

• 作者: 张金秀 燕瑾 王立安 田路 赵利维 韩蕊
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: L-脯氨酸 顺式-4-L-羟脯氨酸 转化条件 转化率
• 年，卷（期）: 2016,（9）
• 所属期刊栏目: 工业微生物
• 页码范围: 1887-1894
• 语种: 中文
• DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150637

摘要

[目的]构建产顺式-4-L-羟脯氨酸(cis-4-Hyp)的工程菌并优化其转化条件.[方法]通过调整大肠杆菌的密码子偏好性以及mRNA二级结构对顺式-4-L-脯氨酸羟化酶(cis-P4H)基因进行优化,构建该基因的表达菌株.采用Ni-NTA亲和层析柱分离纯化cis-P4H,测定cis-P4H的酶活和稳定性.然后采用全细胞催化法制备cis-4-Hyp,通过单因素试验和正交试验对相关的转化条件进行优化.[结果]构建了一株产cis-4-Hyp的工程菌,cis-P4H的比活为2.65 U/mg,半衰期为2.32 h.经过条件优化后,采用OD600为0.9时加入IPTG获得的工程菌菌体构建转化体系,在转化体系pH 6.5,转化温度为31℃,转化时间为60 h时,L-脯氨酸转化率最高达到83.33％.[结论]研究获得的工程菌及转化条件具有良好的工业应用前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王立安	河北师范大学生命科学学院	80	843	16.0	26.0
2	田路	河北师范大学生命科学学院	2	6	2.0	2.0
3	张金秀	河北师范大学生命科学学院	14	35	3.0	4.0
5	赵利维	河北师范大学生命科学学院	2	6	2.0	2.0
6	燕瑾		4	8	2.0	2.0
7	韩蕊	河北师范大学生命科学学院	3	6	2.0	2.0