莱茵衣藻纤毛内运输蛋白IFT46的原核表达纯化及其多克隆抗体的制备

• 作者: 任海月 孟德梅 樊振川 董彬
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 莱茵衣藻 纤毛 IFT46 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2016,（8）
• 所属期刊栏目: 生物技术与方法
• 页码范围: 1124-1132
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.150474

摘要

IFT46是纤毛内运输蛋白IFT复合物B(IFT-B)的一个重要组分,对于纤毛的组装、运动和感知发挥着重要作用.为深入研究IFT46的作用机制,利用ift46基因全序列分别构建了带有GST和MBP标签的原核表达载体pGEX-2T-ift46和pMAL-C2X-ift46,并转入大肠杆菌BL21 (DE3)诱导表达,以15％ SDS-PAGE鉴定,分别获得了分子量为70、86 kDa的重组GST/MBP-IFT46融合蛋白.将亲和纯化的GST-IFT46融合蛋白(纯度95％以上)免疫新西兰大白兔,采集第5次免疫后血清用ELISA测定效价为1:256 000.抗血清依次经Protein A和固定在MBP-IFT46纯化后,用Western blotting和免疫荧光检测抗体特异性,结果表明制备的多克隆抗体能很好地识别莱茵衣藻中的IFT46,而且发现IFT46绝大部分定位在纤毛基体,极少部分沿纤毛呈点状分布,为继续开展IFT46在肥胖症、糖尿病、多囊肾病等纤毛相关疾病中作用机制的研究奠定了重要基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	任海月	天津科技大学食品工程与生物技术学院教育部食品营养与安全重点实验室	2	19	2.0	2.0
2	樊振川	天津科技大学食品工程与生物技术学院教育部食品营养与安全重点实验室	7	19	2.0	4.0
8	孟德梅	天津科技大学食品工程与生物技术学院教育部食品营养与安全重点实验室	8	26	3.0	5.0
10	董彬	天津科技大学食品工程与生物技术学院教育部食品营养与安全重点实验室	4	15	2.0	3.0