莱茵衣藻纤毛内运送蛋白IFT27的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

• 作者: 吴松 孟德梅 樊振川 王晶 董彬
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 莱茵衣藻 纤毛 IFT27 表达纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 532-538
• 页数: 7页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2016.06.0090

摘要

[目的]制备莱茵衣藻纤毛内运送蛋白IFT2727的多克隆抗体.[方法]利用莱茵衣藻itf27基因的cDNA序列构建了原核表达载体pET28a-ift27和pMAL-C2X-ift27,转入大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达,获得了6 × His/MBP-IFT27两种重组融合蛋白.将纯化后的MBP-IFT27融合蛋白免疫新西兰大白兔,5次后采集抗血清,间接ELISA法测定效价,并对抗血清依次经protein A和抗原抗体两步纯化后使用Western Blot和免疫荧光对抗体特异性进行检测.[结果] MBP/6×His-IFT27融合蛋白表达后分子量分别为27 kDa和67 kDa.ELISA测定其效价为1∶256 000,West-em Blot检测可特异性识别莱茵衣藻中的IFT27蛋白,免疫荧光结果显示可检测到纤毛中的IFT27蛋白.[结论]制备出特异性抗莱茵衣藻IFT27的多克隆抗体,效价为1∶256 000,Western Blot可特异性检测到莱茵衣藻中IFT27蛋白的目的条带,免疫荧光可定位IFT27在细胞内分布.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	樊振川		7	19	2.0	4.0
2	王晶		16	31	3.0	4.0
3	孟德梅		8	26	3.0	5.0
4	董彬		4	15	2.0	3.0
5	吴松		2	0	0.0	0.0